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Processes veröffentlichte unsere Arbeit in der Spezial-Ausgabe "Transient Gene Expression for Rapid Protein and Virus-Vector Supply". Die Arbeit wurde in Zusammenarbeit mit Dr. Christoph Synatschke, MPI für Polymer Forschung in Mainz durchgeführt.

Die genetische Veränderung menschlicher T-Lymphozyten mit etablierten nicht-viralen Methoden ist ineffizient. Lineares Polyethylenimin (I-PEI), eines der beliebtesten nicht-viralen Transfektionsmittel für Säugetierzellen im Allgemeinen, erreicht für diese Zellen nur Transfektionsraten im einstelligen Prozentbereich. Als Alternative wird in dieser Arbeit ein gut charakterisierter 24-armiger Poly (2-dimethylamino) ethylmethacrylat (PDMAEMA) -Nanostern (durschnittliches Molekulargewicht: 755 kDa, Polydispersität: <1,21) mittels Atomtransfer-Radikalpolymerisation (ATRP) aus einem Silsesquioxan-Initiator synthetisiert. Dieser Stern wird zur Herstellung von Polyplexen mit Plasmid-DNA (pDNA) verwendet. Unter optimalen Bedingungen transfizieren diese Polyplexe reproduzierbar mehr als 80% der Zellen von einer menschlichen T-Zell-Leukämie-Zelllinie (Jurkat-Zellen). Knapp 90 % der Zellen sind nach der Transfektion vital. Die Polymer-Sterne fördern zudem auch die pDNA-Aufnahme, wenn es einfach einem Gemisch aus Zellen und pDNA zugesetzt wird. Dies ist ein besonders vielversprechender Ansatz für eine effiziente transiente Transfektion in großem Maßstab. Schließlich wurden Vorversuche mit primären T-Zellen von zwei verschiedenen Spendern durchgeführt. Die Ergebnisse waren erneut signifikant besser als für I-PEI, obwohl weitere Untersuchungen zur Reaktion einzelner T-Zellen auf das Transfektionsmittel erforderlich sind, bevor eine der beiden Methoden zur routinemäßigen Transfektion primärer T-Lymphozyten verwendet werden kann.

Hier finden Sie den Artikel: doi:10.3390/pr6100188 ...